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高效液相色譜柱的三個基本要點

更新時間:2022-05-09      點擊次數(shù):1499
  高效液相色譜柱的三個基本要點
  1.柱的構(gòu)造
  高效液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70Kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應(yīng),不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細管柱。液相色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2-20um(5-10um),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出,柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應(yīng)。
  2.柱的發(fā)展方向
  因強調(diào)分析速度而發(fā)展出短柱,柱長3~10cm,填料粒徑2~3um。為提高分析靈敏度,與質(zhì)譜(MS)聯(lián)接,而發(fā)展出窄徑柱、毛細管柱和內(nèi)徑小于0.2mm的微徑柱(MICROBORE)。細管徑柱的優(yōu)點是:①節(jié)省流動相;②靈敏度增加;③樣品量少;④能使用長柱達到高分離度;⑤容易控制柱溫;⑥易于實現(xiàn)LC-MS聯(lián)用。
  但由于柱體積越來越小,柱外效應(yīng)的影響就更加顯著,需要更小池體積的檢測器(甚至采用柱上檢測),更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設(shè)備應(yīng)具備如下性能:輸液泵能精密輸出1~100ul/min的低流量,進樣閥能準確、重復(fù)地進樣微小體積的樣品。且因進樣量小,要求高靈敏度檢測器,電化學(xué)檢測幫質(zhì)譜儀在這方面具有突出優(yōu)點。
  3.柱的填充
  高效液相色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外,還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下,填料粒度>20um時,干法填充制備柱較為合適;顆粒<20um時,濕法填充較為理想。填充方法一般有四種:①高壓勻漿法,多有用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充;②徑向加壓法;③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱;④干法,柱填充的技術(shù)性強,大多數(shù)實驗室使用己填充好的商品柱。
  必須指出,高效液相液相色譜柱的獲得,裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié),但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣,以及配套的色譜儀系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)是否合理。

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